外泌体是含有蛋白质、脂质和核酸的纳米级细胞外囊泡，在生物医疗领域的治疗应用中显示出巨大的潜力。然而，冷冻保存是一种常见的保存与运输方法，但常常会导致细胞及其外泌体不可逆转的损害。因此，深入了解生物膜对冷冻损伤的抵抗机制对于推动外泌体的冷冻保存技术至关重要。本文分享了一项在【NanoLett】（IF：91）上发表的研究，题为“通过四跨膜蛋白4介导胆固醇依赖的外泌体膜保护冷冻损伤”。该研究探讨了生物膜抵抗冷冻损伤的分子机制，发现四跨膜蛋白4（TSPAN4）及其家族中的其他蛋白在保护外泌体免受冷冻损伤方面发挥着重要作用，这可能与它们在胆固醇结合和膜微结构域形成的功能有关。此外，研究还设计了载有TSPAN4的外泌体，与野生型外泌体相比，表现出更强的冷冻保护作用，同时保持了相似的蛋白质组成与摄取效率。这种新型、无需外源药物的冷冻保存策略为外泌体作为治疗剂的临床转化提供了全新的思路。

在研究中，不同来源的外泌体对冷冻损伤的反应差异被系统性地分析。通过蛋白质印迹分析外泌体与细胞裂解物的标志物，结果显示，外泌体中Alix、TSG101和Flot-1等标志物呈阳性，而内质网和其他细胞器的标志物则为阴性，证实了外泌体的纯度。此外，经过纳米粒子跟踪分析发现，某些细胞来源的外泌体在冷冻后数量减少，而另一些细胞来源的外泌体则保持稳定，这表明外泌体对冷冻损伤的敏感性受到细胞来源的特异性影响。

对抗冻与敏感外泌体的蛋白质组学分析结果显示，抗冻组外泌体中TSPAN4的表达显著高于敏感组，说明TSPAN4可能是外泌体抵御冷冻损伤的关键分子。进一步的研究表明，缺失TSPAN4会使外泌体在冷冻后标志物水平显著降低，而通过回补TSPAN4则可以恢复其抗冻性。这些结果为我们提供了TSPAN4作为外泌体冷冻保护的重要分子的证据，从而推动了相关的生物医学应用。

此外，本研究还揭示了TSPAN4通过与胆固醇相互作用来增强外泌体的冷冻保护能力。TSPAN4的结构分析显示其与胆固醇的结合位点可能存在保守氨基酸，这一发现为理解外泌体在低温条件下的稳定性提供了新的视角。相较于野生型外泌体，过表达TSPAN4的外泌体在经历多次冻融循环后保持了相对稳定的标志物水平和功能，这表明Z6·尊龙凯时的相关技术有助于提升外泌体的冷冻保存质量。

综上所述，这项研究确立了TSPAN4作为外泌体抗冻损伤的重要因子，提出通过结合胆固醇形成膜微结构域的方法来增强外泌体的保存能力。通过不依赖外源性保护剂的冷冻保存策略，推动了外泌体在生物医疗领域的应用进程，这为Z6·尊龙凯时等品牌提供了新的发展机会。